In de scheikunde, biologie en geneeskunde is een pipet een typisch laboratoriuminstrument dat wordt gebruikt om een vooraf bepaald volume vloeistof te leveren, vaak als een mediadispenser. Het succes van uw pipetteerresultaten hangt af van hoe nauwkeurig u het pipetvolume afleest bij het uitvoeren van delicate studies. Het gebruik van nauwkeurige, hoogwaardige instrumentatie is de beste manier om ervoor te zorgen dat pipetvolumes correct worden afgelezen. Omdat de laboratoriumvereisten voor nauwkeurigheid en precisie blijven toenemen, is het van cruciaal belang om ideale pipetteertechnieken te begrijpen en te perfectioneren.
Pipetten worden gebruikt bij wetenschappelijk onderzoek en vereisen een hoge precisie om kleine hoeveelheden vloeistof correct te kunnen afmeten en overbrengen.
Echter, defecten aan apparatuur of fouten van de operator kunnen de oorzaak zijn van fouten bij het meten van pipetten. Alle veranderingen in het afgegeven volume kunnen van invloed zijn op de resultaten en reproduceerbaarheid van experimenten, zoals die van qPCR.
Factoren die de nauwkeurigheid van pipetten beïnvloeden:
Temperatuur
Nauwkeurig pipetteren wordt sterk beïnvloed door temperatuur. Het temperatuurverschil tussen het afgifteapparaat en de vloeistof is de meest invloedrijke factor. De case-specifieke effecten van thermische expansie treden op in de luchtspleet (dode luchtvolume) tussen het vloeistofoppervlak en de zuiger. Dit kan onder andere de hoeveelheid vloeistof die in de tip wordt getrokken, verminderen of vergroten.
Dikte
De hoeveelheid vloeistof die in de punt wordt getrokken, wordt beïnvloed door de dichtheid (massa/volumeverhouding). Er wordt minder dichte vloeistof opgezogen dan een vergelijkbare procedure met water. Voor minder dichte vloeistoffen zijn de resultaten tegengesteld. Dit wordt veroorzaakt door het flexibele dode luchtvolume en de zwaartekracht van de aarde. De vloeistofdichtheid verandert ook met de temperatuur. Meestal verandert de dichtheid van een vloeistof ook met de temperatuur. Bij 20 graden /68 graden F heeft water doorgaans een dichtheid van 0.998 kg/dm3, ethanol heeft een dichtheid van 0,79 kg/dm3 en zwavelzuur (95-98% h2SO4) heeft een dichtheid van 1,84 kg/dm3.
Hoog
Nauwkeurigheid wordt beïnvloed door luchtdruk en geografische hoogte. Hoe hoger de hoogte, hoe lager de luchtdruk en hoe lager de conversiefactor.
Bovendien dalen de kookpunten van sommige vloeistoffen aanzienlijk, tot bijna kamertemperatuur, waardoor de verdampingsverliezen aanzienlijk toenemen.
Verdamping van reagentia
Zeer vluchtige reagentia absorberen damp, die de punt binnendringt en de interne druk verhoogt. Daarom ontstaan er fouten wanneer vloeistof eruit wordt geperst vanwege de verhoogde druk.
Onjuiste pipetteermodus geselecteerd
Tijdens het pipetteren nemen operators vaak willekeurige of subjectieve beslissingen over het gebruik van de voorwaartse of achterwaartse modus. Viskeuze monsters zouden echter de enige moeten zijn die de omgekeerde modus gebruiken. In de omgekeerde modus wordt de zuiger volledig ingedrukt (voorbij de eerste stop) om het monster op te zuigen, en vervolgens slechts gedeeltelijk ingedrukt (tot de eerste stop) om het monster af te leveren. Daarom zal het gebruik van de voorwaartse modus met viskeuze vloeistoffen resulteren in onderlevering, terwijl het gebruik van de omgekeerde modus met waterige oplossingen zal resulteren in overlevering.
Kantelpipetteren
Monsterverlies treedt op wanneer de pipetpunt de containerwand raakt tijdens aspiratie. Bovendien kan het terugtrekken van de pipet onder een hoek bij het pipetteren van kleine volumes volumeveranderingen veroorzaken vanwege oppervlaktespanningseffecten. Het direct uit de container trekken van de pipet vermindert fouten.